Blog biología molecular: ADN recombinante

Ejemplo de ADN recombinante artificial y ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

1.- Ejemplo de ADN recombinante para el diagnóstico de la Malaria.

La malaria es una enfermedad endémica en 91 países. El agente causal es el parásito del género Plasmodium, las especies más comunes son las P. vivax y P. falciparum. Estos parasitos son transmitidos a los humanos por la picadura de mosquitos del género Anopheles. Generalmente, para su diagnóstico se emplean varias técnicas que tienen baja sensibilidad, o baja sensibilidad y especificidad, como en la microscopía o detección de anticuerpos. Por ello que se emplea la tecnología del ADN recombinante para la clonación de diversas secuencias de Plasmodium y utilizarlas como controles en el diagnóstico molecular.

T: Clonacion de secuencias de Plasmodium para su uso como controles en el diagnóstico molecular

O: Obtener secuencias clonadas de P.vivax y P. falciparum para su uso como controles en la técnica de PCR para el diagnóstico de malaria.

G: ARN ribosomal de la subunidad pequeña de P. vivax 120 pb y P. falciparum 205 pb

ER: [no menciona el artículo]

EL: enzima ligasa T4

V: pGEM®-T (plásmido)

CR: Escherichia coli de la cepa XL1-Blue MRF

MTG: transformación por choque térmico (30 min 4°C, 90 seg 42°C, 2 min 4°C).

MIC: Cultivo

Detección de clonas positivas:

PCR multiplex
Secuenciación

Detección de proteínas recombinantes:

Western blot
Inmunofluorescencia indirecta (IIF)

2. Ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

Dentro de los mecanismos de transferencia horizontal de genes, está la conjugación bacteriana. En esta, una bacteria donante va a transferir información genética de un plásmido a la bacteria receptora mediante un pili. [2]