domingo, 28 de julio de 2024

Animales transgénicos

 Ejemplo de animal transgénico

Diseño y prueba de un donante porcino humanizado para xenotransplante

1. Tipo de animal transgénico: Minipig Yucatán - knockout y knockin
  • Knockout de PERV (secuencias de retrovirus endógeno porcino) y de genes de glicanos α-Gal, antígeno Sd y del glicano Nau5Gc 
  • Knockin de PL15S (constructo transgénico que contiene 7 genes humanos: CD46, CD55, THBD, PROCR, CD47, TNFAIP3 y HMOX1)

 2- Método de obtención: Recombinación homóloga en células somáticas (fibroblastos de la oreja del cerdo)
  • Ensamblaje del constructo transgénico con los genes humanos de interés
  • Edición del genóma porcino mediante el uso de CRISPR-Cas9
  • Clonación mediante transferencia nuclear de células somáticas
  • Verificación de la expresión de ADN recombinante y proteínas recombinantes en los cerdos transgénicos
3. Función: En el artículo se realizó un transplante de riñón porcino en un mono cynomolgus, paraa explorar el diseño, la creación y la función a largo plazo de injertos de riñon entre diferentes especies. Además de analizar la respuesta inmune y posibles complicaciones del xenotransplante.


Figura1. Donante porcino de Yucatán diseñado para portar 69 ediciones génicas. Tomado de Jacob V. (2023)

2. Ventajas y desventajas de los animales transgénicos

Ventajas 
  • Modelos de enfermedades: Los animales transgénicos permiten crear modelos animales precisos de enfermedades humanas, lo que facilita el estudio de su desarrollo, progresión y posibles tratamientos. Esto es especialmente útil para enfermedades complejas como el cáncer, el Alzheimer y el Parkinson.
  • Desarrollo de fármacos: Estos animales se utilizan para probar la eficacia y seguridad de nuevos fármacos antes de su aplicación en humanos. Al modificar genéticamente un animal para que exprese una enfermedad específica, se pueden evaluar directamente los efectos de un fármaco en esa condición.
  • Producción de proteínas terapéuticas: Animales transgénicos pueden ser modificados para producir grandes cantidades de proteínas humanas terapéuticas, como factores de coagulación o hormonas de crecimiento, que pueden ser utilizadas para tratar diversas enfermedades.
  • Xenotransplantes: La modificación genética de animales podría permitir el uso de sus órganos para trasplantes en humanos, lo que podría resolver la escasez de donantes.
  • Investigación básica: Los animales transgénicos son herramientas valiosas para investigar los mecanismos fundamentales de la biología y la genética.


Desventajas
  • Bienestar animal: La creación y el mantenimiento de animales transgénicos plantean importantes cuestiones éticas sobre el bienestar animal. Algunos procedimientos pueden causar dolor y sufrimiento a los animales.
  • Riesgos para la salud: Existe la preocupación de que los animales transgénicos puedan desarrollar nuevas enfermedades o que los genes modificados puedan transferirse a otras especies, con consecuencias impredecibles para el medio ambiente y la salud humana.
  • Aspectos regulatorios: La creación y el uso de animales transgénicos están sujetos a regulaciones estrictas, lo que puede ralentizar el proceso de investigación y desarrollo.
  • Costos: La ingeniería genética es una tecnología costosa, lo que limita el acceso a ella para muchos investigadores.
  • Afecta la biodiversidad: la ingeniería Genética alteraría todas las limitaciones que la propia naturaleza pone para la relación entre organismos de especies alejadas o no emparentadas. Se argumenta que la manipulación operada en un producto transgénico no solo puede afectar a la salud del ser humano que los usa o consume sino al medio ambiente (afecta a la flora cuando se trata de productos vegetales) o a la biodiversidad (por eliminar especies o invadirlas)



Bibliografía:
1.Anand RP, Layer JV, Heja D, Hirose T, Lassiter G, Firl DJ, et al. Design and testing of a humanized porcine donor for xenotransplantation. Nature [Internet]. 2023 [citado el 28 de julio de 2024];622(7982):393–401. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/37821590/

2. Lara L. Transgénesis una aproximación a sus riesgos y beneficios. 2021 [Internet]. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2709-79272021000100141

miércoles, 17 de julio de 2024

ADN recombinante

 


Ejemplo de ADN recombinante artificial y ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

1.- Ejemplo de ADN recombinante para el diagnóstico de la Malaria.


La malaria es una enfermedad endémica en 91 países. El agente causal es el parásito del género Plasmodium, las especies más comunes son las P. vivax y P. falciparum. Estos parasitos son transmitidos a los humanos por la picadura de mosquitos del género Anopheles. Generalmente, para su diagnóstico se emplean varias técnicas que tienen baja sensibilidad, o baja sensibilidad y especificidad, como en la microscopía o detección de anticuerpos. Por ello que se emplea la tecnología del ADN recombinante para la clonación de diversas secuencias de Plasmodium y utilizarlas como controles en el diagnóstico molecular.

T: Clonacion de secuencias de Plasmodium para su uso como controles en el diagnóstico molecular

O: Obtener secuencias clonadas de P.vivax y P. falciparum para su uso como controles en la técnica de PCR para el diagnóstico de malaria.

G: ARN ribosomal de la subunidad pequeña de P. vivax 120 pb y P. falciparum 205 pb

ER: [no menciona el artículo]

EL: enzima ligasa T4

V: pGEM®-T (plásmido)

CR: Escherichia coli de la cepa XL1-Blue MRF

MTG: transformación por choque térmico (30 min 4°C, 90 seg 42°C, 2 min 4°C).

MIC: Cultivo
Detección de clonas positivas:
  • PCR multiplex
  • Secuenciación
Detección de proteínas recombinantes:
  • Western blot
  • Inmunofluorescencia indirecta (IIF)


2. Ejemplo de recombinación de ácidos nucleicos en la naturaleza

Dentro de los mecanismos de transferencia horizontal de genes, está la conjugación bacteriana. En esta, una bacteria donante va a transferir información genética de un plásmido a la bacteria receptora mediante un pili. [2]
Figura 1. Esquema de la conjugación bacteriana. Tomado de Khan Academy



1.- Pacheco C, Ferrer E, Herrera F. CLONACIÓN DE SECUENCIAS DE Plasmodium PARA SU USO COMO. [Online]; 2019. Acceso 4 de Febrerode 2024. Disponible en:https://www.researchgate.net/publication/340492225_CLONACION_DE_SECUENCIAS_DE_Plasmodium_PARA_SU_USO_COMO_CONTROLES_EN_EL_DIAGNOSTICO_MOLECULAR_CLONING_OF_Plasmodium_SEQUENCES_FOR_ITS_USE_AS_CONTROLS_IN_THE_MOLECULAR_DIAGNOSIS
2. Researchgate.net. [citado el 29 de enero de 2024]. Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/332523550_CONJUGACION_BACTERIANA_Y_RESISTENCIA_A_ANTIBIOTICOS